28°C температурада 25 күн статикалык инкубациядан кийин, *Pleurotus ostreatus* NRC620 лакказасы козу карын өстүрүүчү чөйрөдө эң жогорку активдүүлүктү көрсөттү. Бул фермент үчүн оптималдуу рН жана температура маанилери тиешелүүлүгүнө жараша 3,0 жана 70°C болгон. 40°C жана 50°C температурада 2 саат инкубациядан кийин ферменттин активдүүлүгү тиешелүүлүгүнө жараша 68,33% жана 59,61% сакталган. Цитрат-фосфат буферинде (рН 7,0) 2 саат инкубациядан кийин ферменттин активдүүлүгү 100% бойдон калган. 10 мМ MgSO₄ жана CuSO₄ кошуу ферменттин активдүүлүгүн тиешелүүлүгүнө жараша болжол менен 21% жана 35% га жогорулаткан, ал эми NaCl, MnCl₂, KCl жана CaCl₂ ферменттин активдүүлүгүн басаңдаткан. ABTSти субстрат катары колдонуу менен, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 лактазасынын кинетикалык параметрлери (Km жана Vmax) тиешелүүлүгүнө жараша 1,99 мМ жана 16,217 мкмоль мин−1 L−1 түзгөн. Алма ширесинин үлгүлөрүн ферменттик жол менен иштетүү рН жана илешкектикти бир топ төмөндөткөн жана бул төмөндөө сактоо убактысынын көбөйүшү менен байланыштуу болгон. Лактаза менен иштетүү алма ширесиндеги жалпы фенолдук курамынын бир аз төмөндөшүнө алып келген, бирок антиоксиданттык активдүүлүктүн төмөндөшү байкалган эмес.
Акыркы жылдары изилдөөчүлөр тамак-аш өнөр жайында жашыл биотехнологияны колдонууга көңүл буруп жатышат. Лакказа тамак-аш өнөр жайындагы эң пайдалуу ферменттердин бири болуп саналат жана ширелерди кайра иштетүү, бышыруу, шарапты турукташтыруу жана тамак-аш азыктарынын органолептикалык сапаттарын жакшыртуу сыяктуу тармактарда колдонулат.1Көптөгөн жогорку өсүмдүктөр жана микроорганизмдер лактаза бөлүп чыгарат,2жана дейтеромицеттер, аскомицеттер жана базидиомицеттер сыяктуу козу карындар да лакказаны өндүрө алат.3Лакказа (EC 1.10.3.2) – бул үч башка жез атомунан турган системаны колдонуп, молекулярдык кычкылтекти сууга кайра калыбына келтирүүчү көк оксидаза, ошону менен ар кандай фенолдук кошулмаларды жана ароматтык аминдерди кычкылдандырат. Мөмө-жемиш жана жашылча ширелерин өндүрүүдө ферменттик жана ферменттик эмес күрөң түскө айлануу маанилүү маселелер болуп саналат.4Бул заттар ширенин түсүнө, даамына жана жытына терс таасирин тийгизгендиктен, аларды алып салуу керек.5
Бардык мөмө-жемиштердин ичинен алма дүйнө жүзү боюнча жана Европа Биримдигинде эң көп керектелет. 2019-жылы алма өндүрүү дүйнө жүзү боюнча үчүнчү орунду ээлеп, 87 миллион тоннадан ашты.6Алманын курамында флавоноиддер жана кофеин кислотасы жана хлороген кислотасы сыяктуу фенол кислоталары сыяктуу көптөгөн фенолдук кошулмалар бар.7Алма ширеси, адатта, тунук түрүндө колдонулгандыктан, чыпкалоо процессинде фенолдук компоненттердин болжол менен 50% дан 90% га чейин жоголот.8Бүгүнкү күндө керектөөчүлөр полифенолдору көп болгон булуттуу алма ширеси сыяктуу аз иштетилген азыктарды тандашат. Бирок, фенолдук курамы жогору болгондуктан, алма ширесинин бул түрү өзгөчө түсүн өзгөртүп, карарып кетүүгө жакын.9Алма ширесинин карарышын азайтуу же алдын алуу үчүн ар кандай технологиялар, анын ичинде 60–90°C температурада пастерлөө сыяктуу жылуулук менен иштетүү ыкмалары колдонулат.10Бирок, Sauceda-Gálvez изилдөө боюнча11, термикалык иштетүү учма химиялык заттарды жок кылып, алма ширесинин органолептикалык сапаттарына таасир этиши мүмкүн. Термикалык иштетүү ыкмаларына альтернатива катары өтө критикалык көмүр кычкыл газы, ультрафиолет нурлануусу, ультраүн, жогорку гидростатикалык басым же жогорку басымдагы гомогендештирүү кирет.12Бул технологиялардын натыйжалуулугу жана ылайыктуу жемиш ширелеринин түшүмү колдонулган параметрлерге жана продукциянын мүнөздөмөлөрүнө жараша болот. Алардын кеңири колдонулушу жогорку чыгымдар, айрым азык-түлүк продукцияларынын сапатына терс таасири же ферменттердин жетишсиз инактивдештирилиши менен чектелет.13,14
Лакказа жемиш ширесин турукташтыруу жана тунук кылуу үчүн колдонулушу мүмкүн.15Гөкмен жана башкалар.16жемиш ширесин тунуктоо үчүн лакказаны колдонууну сунуштайбыз, анткени ал фенолдук кошулмаларды полимерлерге же олигомерлерге айландыруу менен натыйжалуу жок кылат, алар ар кандай ультрафильтрациялык мембрана тарабынан оңой алынып салынат, бул алма ширесинин 50°C температурада алты жумага чейин туруктуу түсүн жана тунуктугун сактоого мүмкүндүк берет. Тазаланган *Trichoderma* лакказасы глинозем мончокторуна иммобилизацияланып, алма ширесинин микробдук булганышынан улам пайда болгон даамсыз кошулмаларды тандап жок кылуу үчүн колдонулган.17
Алма ширесинин учуучу компоненттеринин болжол менен 80-90% эфирлер жана альдегиддер болуп саналат, алар ширеге өзгөчө жыт берет.18*Trametes versicolor* лакказасы алма ширесин тунук кылуу үчүн жаш кокос кабыгынын табигый буласынан жасалган арзан баадагы таянычка иммобилизацияланган.19Мурунку изилдөөлөр алма ширесинин турукташуусу (түсү жана булуттуулугу) ферментсиз же иммобилизациялоо ыкмаларын колдонуу менен же ультрафильтрация менен айкалыштырып изилденген.5,19Бирок, сактоо учурунда алма ширесинин физикалык-химиялык касиеттерине козу карын лактазаларынын таасири белгисиз бойдон калууда. Ошондуктан, бул изилдөөнүн максаты козу карын лактазалары менен иштетилгенден жана эки жума муздаткычта сакталгандан кийин алма ширесинин физикалык-химиялык касиеттеринин, фенолдук кошулмалардын курамынын жана антиоксиданттык активдүүлүгүнүн өзгөрүшүн эксперименталдык түрдө изилдөө болгон. Лактазалар фенолдук кошулмаларды кычкылдандыруу жөндөмүнө ээ, бул аларды ширени тунуктоону кошо алганда, ар кандай өнөр жай процесстеринде колдонуу үчүн келечектүү кылат. Бул изилдөөдө *Pleurotus ostreatus* NRC 620дан алынган лактазалар изилденип, алардын активдүүлүгү жана ширени тунуктоодогу натыйжалуулугу үчүн идеалдуу шарттарга көңүл бурулган. Устрица козу карындары (P. ostreatus NRC 620) боюнча изилдөөлөр дагы эле чектелүү болсо да, мурунку изилдөөлөр Trametes versicolor жана Ganoderma lucidum сыяктуу ар кандай козу карын булактарынан алынган ферменттерди изилдеген. Бул изилдөөнүн максаты бул ферменттин тамак-аш өнөр жайында колдонулушунун потенциалын баалоо жана анын уникалдуу касиеттерин, айрыкча идеалдуу рН жана температураны белгилөө болгон.
2,2′-Азооксибис(3-этилбензотиазолин-6-сульфон кислотасы) (ABTS) Sigma-Aldrich (Канада) компаниясынан сатылып алынган. Башка бардык реагенттер аналитикалык класста болгон.
Улуттук изилдөө борборунун Микробдук культураларды чогултуу борбору белгилүү устрица козу карынынын NRC620 штаммын алган. Субкультурадан кийин, бул штамм картошка декстроза агарынын жантайыңкы жерлеринде 4°C температурада сакталган. Эмдөө ыкмасы төмөнкүдөй болгон: 10 күндүк, толук өнүккөн мицелий картошка декстроза агарынын плиталарына эмделип, 28°C температурада инкубацияланган. 10 күндөн кийин, агар чөйрөсүнөн стерилдүү металл перфоратор менен үч 12 мм диаметрдеги мицелий блоктору алынып, 50 мл стерилденген культуралык чөйрөнү (рН 5.0, мурда Отман ж.б. тарабынан сүрөттөлгөндөй) камтыган пахта тыгындары бар 250 мл Эрленмейер колбаларына салынган.20). Культуралар 28°C температурада 18 күн инкубацияланган. Андан кийин культуралар Whatman №1 чыпка кагазы аркылуу чыпкаланган, ал эми алынган үстүнкү катмар ферменттин булагы катары кызмат кылган.
Лакказанын активдүүлүгү ABTS субстрат катары колдонулуп аныкталган. Реакциялык аралашмада (2 мл) 500 мкл 0,3 мМ ABTS (0,1 М натрий цитратынын буферинде эриген, рН 4,5) жана дистилденген суу менен суюлтулган ферменттин керектүү өлчөмү камтылган.21,22Лакказа бөлмө температурасында (28 °C ± 2) ABTSти кычкылдандыра аларын эске алганда, ABTSтин кычкылдануусу 420 нмде (ε) сиңирүүнүн жогорулашын өлчөө менен аныкталган.420= 36 000 см-1 M -1) Agilent Carry-100 UV спектрофотометрин колдонуу менен. Мүнөтүнө 1 мкмоль ABTS кычкылдандыруу үчүн лактаза активдүүлүгүнүн бир бирдиги талап кылынган. Белоктун концентрациясы ички көзөмөл катары уйдун кан сары суусундагы альбуминди колдонуу менен Брэдфорд ыкмасы менен аныкталган.23,24
Устрица козу карынынын NRC 620 штаммынан фермент алынгандан кийин, анын активдүүлүгү 28°C статикалык шарттарда 25 күн бою ар кандай өстүрүү аралыктарында өлчөнгөн.
Температуранын лакказа активдүүлүгүнө тийгизген таасирин изилдөө үчүн 20дан 90 °Cге чейинки температура диапазонунда эксперименттер жүргүзүлдү. Ферментти кошуудан жана реакцияны баштоодон мурун, буфер (0,1 М натрий цитраты, рН 4,5) жана субстрат (ABTS) аралаштырылып, ар кандай температурада 5 мүнөт инкубацияланган. Ферменттин термикалык туруктуулугу 0,05 М натрий фосфаты буферинде (рН 7,0) тиешелүүлүгүнө жараша 40, 50, 60 жана 70 °C температурада 2 саат инкубациялоо аркылуу бааланган. Андан кийин калдык активдүүлүк ABTS субстратын колдонуу менен бааланган.
рНнын лакказа активдүүлүгүнө тийгизген таасири рН диапазону 2,5тен 7,0гө чейинки 0,1 М цитрат-фосфат буферлеринде субстрат катары ABTS колдонуу менен бааланган. Ферменттин эритмеси рН туруктуулугун баалоо үчүн 40°C температурада эки саат бою 0,1 М цитрат жана Tris буферлеринде (рН 3, 4, 6 жана 7) инкубацияланган. ABTS субстрат катары колдонулган калдык активдүүлүк инкубациядан кийин эсептелген.
Лакказа ар кандай металл иондорун (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+ жана Mn2+) камтыган натрий фосфат буферинде (0,05 М, рН 7,0) тиешелүүлүгүнө жараша 2,5 мМ жана 10 мМ концентрацияларда 10 мүнөт инкубацияланган. Андан кийин реакцияны баштоо үчүн субстрат (ABTS) кошулуп, салыштырмалуу активдүүлүк бааланган.
Кинетикалык параметрлерди (Vmax жана Km) аныктоо үчүн рН 4,5 деңгээлинде ар кандай концентрацияларда (0,025–3 мМ) лакказа менен ABTS кычкылдануусу өлчөнгөн.туруктууларМихаэлис-Ментен теңдемесинин мааниси Лайнвивер-Бурк графигин колдонуу менен эсептелген, ал реакция ылдамдыгынын субстраттын концентрациясынын функциясы катары тескери маанисин көрсөтөт. Кинетикалык константалар GraphPad Prism 6.01 версиясындагы программалык камсыздоону колдонуу менен Лайнвивер-Бурк графигинен эсептелген.
Алмаларды кран суусу менен жакшылап жуугандан кийин, алар экиге бөлүнүп, толугу менен автоматтык түрдө Braun MP80 алма ширеси сыккыч (Германияда жасалган) менен ширеси сыгылып алынган. Шире төрт катмар тампон аркылуу чыпкаланган. Контролдук топко эч кандай ферменттер кошулган эмес, ал эми жаңы даярдалган алма ширесине 2,0% лактаза (сыналган эң натыйжалуу концентрация) кошулуп, андан кийин 4°C температурада эки жума сакталган.
Титрленүүчү кычкылдуулук (TA) жана рН Боултон жана башкалардын ыкмасы боюнча аныкталган.ал.27Ар бир үлгүнүн рН мааниси санариптик рН өлчөгүч (JENWAY 3510 рН метр) менен өлчөнгөн. Титрленүүчү кычкылдуулук (TA) төмөнкү формуланы колдонуу менен алма кислотасынын негизинде эсептелген.
Мында V жана C – титрлөөдө колдонулган натрий гидроксидинин эритмесинин көлөмү (мл) жана концентрациясы (0,1 моль/л). K – алма кислотасынын конверсия коэффициенти, 0,067ге барабар, ал эми W – алма ширесинин массасы (г).
Жалпы эрүүчү катуу заттар (TDS) бардык шире үлгүлөрүнүн курамы PAL-1 чөнтөк рефрактометри (ATAGO, Токио, Япония) аркылуу аныкталган. Ар бир өлчөөдөн кийин оптикалык линза деиондоштурулган суу менен чайкалып, ар бир алма ширесинин үлгүсү үч жолу текшерилген. Ар бир үлгүнүн мааниси үч өлчөөнүн орточо мааниси менен эсептелген. Ар бир алма ширесинин үлгүсү үчүн орточо ± стандарттык четтөө да ушул натыйжаларды орточо мааниси менен эсептелген.
Алма ширесинин үлгүлөрүнүн илешкектүүлүгү айланма вискозиметр (RV, Rheotest 2, Германия) аркылуу бааланган. Үлгү вискозиметрдин "S2" цилиндринин ичине жайгаштырылган. Көрүнгөн илешкектүүлүк жылышуу чыңалуусунун жылышуу ылдамдыгына карата ийри сызыгынын жантайыңкылыгы менен көрсөтүлгөн, ал жылышуу чыңалуусунан жана ар кандай жылышуу ылдамдыктарындагы тиешелүү ийри сызыктардан эсептелген (1,00дөн 437,4 с⁻¹ге чейин). Көрүнгөн илешкектүүлүктү эсептөө формуласы төмөнкүдөй:
Мында η – көрүнгөн илешкектүүлүк (cP), τ – жылышуу чыңалуусу (dyn/cm²), γ – жылышуу ылдамдыгы (sec⁻¹), ал эми (τ) – момент (α) жана цилиндр (Z) маанилерин колдонуу менен төмөнкү формуланы колдонуу менен эсептелет: τ = Z . α.
Браунинг индекси Мейдав жана башкалардын ыкмасы боюнча аныкталганал.2910 мл шире үлгүсү 2750 xg басымда 10 мүнөт центрифугаланган. Ширенин үстүнкү катмарынын 5 мли 5 мл 95% этанол менен аралаштырылган. Аралашманын абсорбциясы 420 нмде Shimadzu UV спектрофотометри (UV-1601 PC) менен өлчөнгөн.
Жалпы фенолдук курамы (TPC) Боултон ж.б. тарабынан сүрөттөлгөндөй, Фолин-Чиокалтеу реактивин колдонуу менен колориметриялык жол менен аныкталган.[27]0дөн 500 мг/лге чейинки концентрациялар үчүн галл кислотасынын стандарттуу ийри сызыгы түзүлгөн (r²= 0,997). Жыйынтыктар галл кислотасынын эквиваленттери катары көрсөтүлөт (мг GAE/мл).
25 мкл алма ширесине 125 мкл дистилденген суу жана 2850 мкл FRAP эритмесин кошуп, аралашманы караңгы жерде калтырыңыз.30мүн. Андан кийин Shimadzu UV спектрофотометрин (UV-1601 PC) колдонуп, 593 нм толкун узундугундагы абсорбцияны өлчөңүз. FRAP реагенти 300 мМ ацетат буферин (рН 3.6), 20 мМ темир(III) хлоридин жана 10 мМ 2,4,6-трис(2-пиридил)триазинди (TPTZ) (40 мМ HClде эриген) 10:1:1 катышында аралаштыруу менен даярдалган. Стандарттык ийри сызык Troloxту стандарт катары колдонуу менен түзүлгөн (R²= 0.999), ал эми жыйынтыктар μM Trolox/мл катары көрсөтүлөт.
Дарыланган жана иштетилбеген ширелердин антиоксиданттык активдүүлүгү DPPH эркин радикалдарын тазалоо жөндөмүн баалоо үчүн DPPH ыкмасын колдонуу менен аныкталган.31Он микролитр шире метанолдогу 1 мл DPPH эритмеси (100 мкМ) менен аралаштырылган. Караңгыда 30 мүнөт реакция жүргүзгөндөн кийин, аралашманын абсорбциясы 517 нмде Shimadzu UV спектрофотометри (UV-1601 PC) менен өлчөнгөн. Жыйынтыктар калибрлөө ийри сызыгына негизделген тролокс эквиваленттери (μM тролокс/мл) катары туюнтулган (R2= 0.990).
Алынган маалыматтар көрсөткөндөй, NRC 620 устрица козу карындарында лакказанын максималдуу өндүрүлүшү ачытуунун 18-күнүнүн аягында байкалып, 1302 U/L активдүүлүгүнө жеткен. Бул лакказанын өндүрүлүшү үчүн оптималдуу өстүрүү убактысын аныктоо үчүн негиз болуп кызмат кылган (1-сүрөт). Ферменттин өндүрүлүшү өстүрүү убактысынын көбөйүшү менен көбөйгөнү менен, өсүү темпи өстүрүү убактысына түз пропорционалдуу болгон эмес; 21 күндөн кийин ферменттин активдүүлүгү болгону 90 U/Lге (1390 U/Lге чейин) көбөйгөн. Ошондуктан, акырында, өстүрүү убактысынын көбөйүшүнүн экономикалык пайдасы менен продуктунун түшүмүн тең салмактоо үчүн оптималдуу өстүрүү убактысы катары 18 күн тандалып алынган.
Pleurotus ostreatus NRC 620 кычыткысындагы лактазанын түшүмдүүлүгүнө өстүрүү убактысынын таасири. Үч (12 мм) грибоктук мицелий блоктору 50 мл стерилдүү чөйрөгө эмделип, андан кийин 28°C температурада ар кандай убакыттар бою өстүрүлгөн.
Башка изилдөөлөргө ылайык, биздин жыйынтыктар козу карындар тарабынан лактазанын эң жогорку бөлүнүп чыгышына жетүү үчүн идеалдуу өстүрүү мезгили 7 күндөн 36 күнгө чейин болушу мүмкүн экенин көрсөтүп турат.32Эзике жана башкалардын айтымында.33, *Trametes polyzona* WRF03 ачытуунун тогузунчу күнүнүн аягында 1637 U/мг белоктун белгилүү бир активдүүлүгү менен эң көп лактаза өндүргөн. Андан тышкары, Отман жана башкалар.34*Trichoderma harzianum* S7113 өстүрүүнүн бешинчи күнүндө көп өлчөмдө лактаза бөлүп чыгарарын аныкташкан. Лактазанын өндүрүш ылдамдыгы он төртүнчү күнү эң жогорку активдүүлүккө жетип, андан кийин акырындык менен төмөндөгөн.34Ферменттин бөлүнүп чыгышы негизги өсүү фазасында да болушу мүмкүн, бирок ал, адатта, ортоңку фазада туу чокусуна жетет жана көмүртек же азот булагын керектөө менен шартталат.34,35
Pleurotus ostreatus NRC 620 лаказасы 50°Cден 80°Cге чейинки кеңири температура диапазонунда жогорку активдүүлүктү көрсөтсө да, эң жогорку активдүүлүккө (69–98%) жакындап калган, анын максималдуу активдүүлүгү 70°Cде байкалган (2a-сүрөт). Бул температура диапазонунан тышкары ферменттин активдүүлүгү болжол менен 70°Cде төмөндөгөн. Бул жыйынтыктар ферменттин жогорку температурада активдүү экенин көрсөтүп турат, анткени жогорку температура реакциянын кинетикалык энергиясын жогорулатат.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620дагы лакказа активдүүлүгүнө реакция температурасынын (а) жана рН (б) таасири. 20дан 90 °Cге чейинки температурага ферментти кошуудан жана реакцияны баштоодон мурун аралашманы ар кандай температурада 5 мүнөт алдын ала инкубациялоо аркылуу жетишилген. рНдын лакказа активдүүлүгүнө тийгизген таасири 2,5тен 7,0гө чейинки рН диапазонунда 0,1 М цитрат-фосфат буферин камтыган эритмелерде субстрат катары ABTS колдонулуп бааланган.
Эзике жана башкалардын айтымындаал.33, *Trametes polyzona* WRF03 лакказасы үчүн оптималдуу температура 55 °C, бул *Ganoderma lucidum* үчүн белгиленген температура менен бирдей.laccase36жана *Trametes polyzona* KU-RNW02737 үчүн оптималдуу температурага (50 °C) окшошлактаза . Baldrian38башка лигнинди ажыратуучу ферменттик системалар сыяктуу эле, лакказа үчүн идеалдуу температура диапазону 50 жана 70 °C ортосунда экенин белгилейт.
Жыйынтыктар көрсөткөндөй, фермент рН 3.0до эң жогорку активдүүлүктү көрсөтүп, рН 3.5те 94% активдүүлүккө жеткен. Бирок, ал 2.5тен 7.0гө чейинки кеңири рН диапазонунда активдүү бойдон калган (2b-сүрөт). Андан тышкары, ал нейтралдуу же щелочтуу шарттарга салыштырмалуу кислоталуу шарттарда жогорку активдүүлүктү көрсөткөн. Анын активдүүлүгү 2.5тен 4.5ке чейинки рН диапазонунда кеминде 77% бойдон калган, бирок рН 7.0до болжол менен 38% гана жеткен. *Trametes polyzona* WRF03 дан алынган лакказа үчүн оптималдуу рН 4.533 болгон, бул *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40 жана *Trametes hirsuta* 41 дан алынган лакказалар үчүн рН менен бирдей. Бирок, Чайрин жана башкалардын изилдөөсүнө ылайык.42, *Polymorpha f. sp.* WR710-1ден алынган лакказа үчүн оптималдуу рН 2,2, ал эми *Polymorpha f. sp.* IBL-04төн алынган лакказа үчүн оптималдуу рН 5,043. Гидроксид аниондорунун (лакказа ингибиторунун) T2/T3 лакказасынын жез атомдоруна байланышы нейтралдуу же щелочтуу рН шарттарында лакказа активдүүлүгүнүн төмөндөшүнүн себеби болушу мүмкүн. Бул T1 борборунан T2/T3 борборуна ички электрондордун өткөрүлүшүн үзгүлтүккө учуратышы мүмкүн, ошону мененчектөөчүферменттин активдүүлүгү 23,44
Ферментти ар кандай температурада инкубациялоо менен, инкубация убактысы да, температурасы да ферменттин туруктуулугуна таасир этери аныкталды. Белгилей кетчү нерсе, *Trametes polyzona* NRC 620дан алынган лакказа 40℃ жана 50℃ температурада жогорку туруктуулукту көрсөтүп, 120 мүнөттөн кийин баштапкы активдүүлүгүнүн 68,33% жана 59,61% сактап калган (3a-сүрөт). Ал эми, ошол эле шарттарда (40℃ жана 50℃, 120 мүнөт), *Trametes polyzona* WRF03тан алынган лакказа өзүнүн активдүүлүгүнүн тиешелүүлүгүнө жараша 64,38% жана 42,92% сактап калган.33Тескерисинче, инкубация убактысынын жана температурасынын жогорулашы *Trametes polyzona* NRC 620 лакказынын туруктуулугун төмөндөттү; 60℃ жана 70℃ температурада 60 мүнөт инкубациялагандан кийин, анын активдүүлүгү тиешелүүлүгүнө жараша 39,24% жана 1,72% га чейин төмөндөдү (3a-сүрөт). Эксперименталдык жыйынтыктарга ылайык, *Trametes polyzona* WRF03 лакказасы термикалык иштетүү процессинде 40 жана 50℃ температурада жогорку туруктуулукту көрсөттү.33Ошо сыяктуу эле, Луангжароенкит жана башкаларал.37жана Чаирин жана башкаларал.42Trametes polyzona KURNW027 жана Trametes polyzona WR710-1 лакказаларынын 50 °C температурада 1 саат бою туруктуулугу жөнүндө кабарлаган. Ар кандай биотехнологиялык тармактарда колдонулуучу пайдалуу биокатализатор катары, лакказа кеңири температура диапазонунда жакшы туруктуулукка жана иштөөгө ээ болушу керек.
*Pleurotus ostreatus* NRC 620дан алынган лакказанын термостатикалык туруктуулугу (а) жана рН туруктуулугу (б). Термостатикалык туруктуулук ферменттин эритмесин 0,05 М натрий фосфаты буферинде (рН 7,0) тиешелүүлүгүнө жараша 40, 50, 60 жана 70 °C температурада 2 саат инкубациялоо аркылуу бааланган. рН туруктуулугу ферменттин эритмесин 0,1 М цитрат буферинде жана Tris буферинде (рН 3, 4, 6 жана 7) 40 °C температурада 2 саат инкубациялоо аркылуу бааланган. Калдык активдүүлүк инкубациядан кийин субстрат катары ABTS колдонуу менен эсептелген.
Ферменттерди колдонуу жана сактоо үчүн оптималдуу шарттарды аныктоо үчүн биз рНнын лакказанын туруктуулугуна тийгизген таасирин изилдедик. Ар кандай рН маанилерине дуушар болуу белоктун түзүлүшүнүн туруктуулугуна олуттуу таасир этип, фермент молекуласынын туруктуулугуна жана активдүүлүгүнө таасир эткен. Жыйынтыктар көрсөткөндөй, фермент кислоталуу шарттарда анча туруктуу эмес, ал эми жогорку рН маанилеринде (нейтралдуу жана щелочтуу аймактар) жакшыраак туруктуулукту көрсөттү. 7,0, 6,0, 4,0 жана 3,0 рН маанилеринде 120 мүнөттөн кийин ферменттин кармалуу ылдамдыгы болжол менен 100%, 62,54%, 52,39% жана 11,14% түзгөн (3b-сүрөт). *Strombus multisus* WRF03 лакказасы нейтралдуу рН маанилеринде (5,5–6,5) жогорку туруктуулукту жана кислоталуу рН маанилеринде (4,0дон төмөн) төмөнкү туруктуулукту көрсөттү. рН мааниси 5,5, 6,0 жана 6,5 болгондо 120 мүнөттөн кийин ферменттин кармалуу көрсөткүчтөрү тиешелүүлүгүнө жараша болжол менен 82%, 100% жана 93% түзгөн.33Хайрин жана башкалар.42Trametes polyzona WR710-1ден алынган лакказа рН 6,0дон 7,0го чейинки диапазондо туруктуу экенин белгилешти, ал эми Сайед жана башкалар.45лакказа нейтралдуу рН шарттарында туруктуураак экенин көрсөттү. Бирок, Cerrena unicolorдон алынган лакказа щелочтуу шарттарда да туруктуулукту көрсөттү (рН 9.0)46Изилденген лакказалар кеңири рН диапазонунда жогорку туруктуулукту көрсөттү. Бул өнөр жайлык колдонмолор үчүн маанилүү мүнөздөмө болушу мүмкүн.
Айрым металл иондору ферменттердин активдүүлүгүнө стимулдаштыруучу жана ингибирлөөчү таасир тийгизгендиктен, алардын ферменттердин активдүүлүгүнө тийгизген таасирин өнөр жайлык колдонмолордо эске алуу керек. Бул абдан маанилүү, анткени металл иондору клеткадан тышкаркы ферменттердин туруктуулугуна жана синтезине таасир эте турган кеңири таралган айлана-чөйрөнүн булгоочу заттары болуп саналат.47*Pleurotus ostreatus* NRC 620дан алынган лакказага бир нече металл иондорунун таасирин изилдөө үчүн биз тиешелүү эксперименттерди жүргүздүк. 4-сүрөттө көрсөтүлгөндөй, колдонулган металлдын түрүнө жараша, металл иондорунун концентрациясын 2,5 мМден 10 мМге чейин жогорулатуу ферменттин функциясына терс таасирин тийгизди. Мисалы,Mg²⁺ , Co²⁺ , Zn²⁺, жанаCu²⁺ферменттин активдүүлүгүн стимулдай жана активдештире алат, ал эмиНа⁺ , Mn²⁺ , Ca²⁺, жанаK⁺ферменттин активдүүлүгүн басаңдатышы мүмкүн. 10 мМ концентрациясында Cu²⁺ жана Mg²⁺ иондору *Pleurotus ostreatus* NRC 620дан алынган лакказа активдүүлүгүнүн эң күчтүү активаторлору болуп, тиешелүүлүгүнө жараша болжол менен 34% жана 20% активация даражасын камсыз кылган. Бирок, 10 мМ концентрациясында Ca²⁺ иондору лакказа активдүүлүгүнүн эң күчтүү ингибитору болуп, ферменттин активдүүлүгүн болжол менен 60% га төмөндөткөн.
Pleurotus ostreatus NRC 620 лактазасынын активдүүлүгүнө металл иондорунун таасири. Лактаза 2,5 мМ жана 10 мМ концентрациясында ар кандай металл иондорун камтыган натрий фосфат буферинде (0,05 М, рН 7,0) 10 мүнөт инкубацияланган. Андан кийин реакция субстрат (ABTS) кошуу менен башталган, андан кийин салыштырмалуу активдүүлүк өлчөнгөн.
Биздин жыйынтыктар Mg²⁺ жана Cu²⁺ *Trametes polyzona* WRF03³ активдүүлүгүн жогорулатарын аныктаган башка авторлордун жыйынтыктары менен дал келет. Кастано жана башкалар⁴⁸ *Xylaria* түрүнөн алынган лакказа кандайдыр бир деңгээлде жез иондору (Cu²⁺) менен стимулдалаарын аныкташкан. Андан тышкары, Foroutanfar жана башкалар⁴⁹ жана Si жана башкалар⁵⁰ тиешелүүлүгүнө жараша *Paraconiothyrium variabile* жана *Trametes pubescens* лакказалары боюнча ушул сыяктуу изилдөөлөрдү жүргүзүшкөн. Бул ферменттин II типтеги жез менен байланыштыруучу жери (T2) белгилүү бир концентрацияда Cu²⁺ менен каныккан болушу мүмкүн, бул жогорку Cu²⁺³⁹ концентрацияларында лакказа активдүүлүгүн стимулдаштырууну түшүндүрүшү мүмкүн. Ак чирик козу карындарынын лактазалары бир нече жез атомдорун камтыган оксидазалар болгондуктан, жез иондорунун лактазанын активдүүлүгүнө тийгизген таасири ар түрдүү жана стимулдаштыруучу жана ингибирлөөчүдөн нейтралдууга чейин болот.⁵¹ Ал эми Чжоу жана башкалар. [52]деп билдирдиCu²⁺Тайвандык жер астындагы термиттин (Odontotermes formosanus) лакказа активдүүлүгүн баскан. Бирок, Cerena sp. HYB07 лакказалары[53]жана Clitocybe maxima[54]жез иондорунун таасирине кабылган эмес.
Субстраттын спецификалуулугу анын кинетикалык параметрлери (Km жана Vmax) менен көрсөтүлгөн; субстраттын ферментке байланышуу жакындыгы канчалык күчтүү болсо, Km мааниси ошончолук төмөн жана субстраттын спецификалуулугу ошончолук жогору болот.3,21,55*Pleurotus ostreatus* NRC 620дан алынган лакказанын кинетикалык параметрлери (Km жана Vmax) GraphPad Prism 6.0 программасын колдонуу менен Lineweaver-Burk графигин түзүү менен аныкталган (5-сүрөт). ABTS субстрат катары колдонулганда, натыйжалар 1,99 мМ жана 16217 мкмоль болгон.мин⁻¹ L⁻¹,тиешелүүлүгүнө жараша. Элсайед жана башкалар.21ABTS кычкылдануусунун Km маанилери тиешелүүлүгүнө жараша 0,1 мМ жана 0,064 мМ түзгөнүн билдиришти, бул Lac A жана Lac B изоферменттеринин ABTSке жогорку жакындыгын көрсөтөт. Андан тышкары, Vmax маанилери 0,182 мкмоль түзгөнмин⁻¹жана 0,603 мкмольмин⁻¹тиешелүүлүгүнө жараша. Алынган Km мааниси Trametes polyzona WRF03 көрсөткүчүнөн (8,66 мМ) төмөн болгон; андан тышкары, алардын Vmax мааниси (1429 ммоль мин⁻¹) да болгонтөмөнABTS субстрат катары колдонулганда.33 Ошо сыяктуу эле, Lentinus squarrosulus MR13 жана Trametes sp. AH28-2 лактаза концентрацияларынын Km маанилери тиешелүүлүгүнө жараша 0,0714 мМ жана 0,025 мМ, ал эми Vmax маанилери 0,0091 мМ мин−1 жана 0,67 мМ мин−1 мг−1 болгон (ABTSке салыштырмалуу)тиешелүүлүгүнө жараша.56,57
*Pleurotus ostreatus* NRC 620 лакказанын активдүүлүгүнө ABTS концентрациясынын таасири изилденип, баштапкы реакция ылдамдыгынын ABTS концентрациясына тескери маанисинин Lineweaver-Burk графиги түзүлдү. Кинетикалык параметрлерди (Vmax жана Km) аныктоо үчүн ар кандай концентрациядагы (0,025–3,0 мМ) лакказанын кычкылдануу реакциясы рН 4,5те өлчөнгөн. Михаэлис-Ментендин кинетикалык константалары реакция ылдамдыгынын субстрат концентрациясына тескери маанисинин Lineweaver-Burk графигин колдонуу менен эсептелген. Кинетикалык константалар GraphPad Prism 6.01 программасын колдонуу менен Lineweaver-Burk графигинен эсептелген.
Пектиназалар сыяктуу салттуу тунуктоочу ферменттер пектиндик заттарды гидролиздеп, илешкектикти жана булуттуулукту азайтат. Алар структуралык полисахариддерди натыйжалуу ажыратат жана көбүнчө целлюлазалар жана гемицеллюлазалар сыяктуу башка ферменттер менен бирге колдонулуп, суюктуктун чыгышын жана тунуктугун жакшыртуу үчүн колдонулат. Бирок, пектиназалар фенолдук кошулмаларды атайын бутага албайт, алар, айрыкча алма жана жүзүм ширеси сыяктуу ширелерде, булуттуулукка жана кычкылдануу менен күрөң түскө айланууга негизги салым кошушат.58Ал эми лакказа фенолдук кошулмалардын кычкылдануусун катализдеп, аларды чөкмө же чыпкалоо аркылуу алып салууга боло турган чоңураак, эрибеген молекулаларга полимерлейт. Бул механизм тунуктугун жакшыртып гана тим болбостон, фенолдук кошулмалардан улам кычкылдануу менен күрөң түскө өтүү ыктымалдыгын азайтуу менен ширенин сактоо мөөнөтүн узартат. Андан тышкары, лакказа негизиндеги тунуктоо процесстери жумшак иштетүү шарттарында (рН 3,5–5,5, температура 25–40 °C) жүргүзүлүшү мүмкүн, бул аларды азыктык же органолептикалык касиеттерине доо кетирбестен назик ширелер үчүн ылайыктуу кылат.59Изилдөөлөр көрсөткөндөй, пектиназа менен дарылоо ширени 1–2 сааттын ичинде тунук кыла алат, ал эми лакказа менен дарылоо фенолдук кошулмаларды толугу менен азайтуу үчүн адатта узак реакция убактысын (3–6 саат) талап кылат. Бирок, бул процессти ферментти иммобилизациялоо же лакказаны механикалык тунуктоо ыкмалары менен айкалыштыруу аркылуу оптималдаштырууга болот.60Бул изилдөөдө чийки экстракттын ферменттик профилин аныктоодо лакказа жана α-амилазанын олуттуу активдүүлүгү аныкталган, ал эми пектиназа жана ксиланазанын активдүүлүгү өтө төмөн болгон, ал эми целлюлазанын активдүүлүгү аныкталган эмес. Ошондуктан, булуттуулуктун жана фенолдук курамдын азайышы негизинен лакказанын таасиринен улам болгон, ал эми илешкектиктин өзгөрүшү жарым-жартылай амилазанын таасиринен улам болушу мүмкүн.
1-таблицада жаңы сыгылган алма ширесинин жана лакказа менен иштетилген үлгүлөрдүн физикалык-химиялык параметрлери көрсөтүлгөн. Жыйынтыктар көрсөткөндөй, жаңы сыгылган алма ширесинин түшүмү (71,59%) лакказа менен иштетилген үлгүлөргө караганда (87,34%) төмөн болгон. Бул жыйынтыктар Пильник жана Оранждын жыйынтыктарына дал келет.61, жемиштерди кайра иштетүүдө ферменттерди колдонуу ширенин чыгышын жогорулатып, чыпкалоону жакшыртып, концентрациясы жогору, жогорку сапаттагы тунук шире ала аларын көрсөткөн. Ширенин чыгышынын көбөйүшү негизинен ширедеги эрүүчү канттардын курамынын көбөйүшүнө байланыштуу. Жемиштердин ферменттик гидролизи учурунда продуктунун клетка дубалдарындагы мезоглея жана пектиндер жок болуп, нейтралдуу канттар жана кислоталар сыяктуу эрүүчү заттарга айланат.62.Фермент менен иштетилген алма ширесинин рН мааниси контролдук топко караганда бир кыйла төмөн болгон (P < 0,05), ал эми сактоо учурунда эки топтун тең рН мааниси бир кыйла жогорулаган (1-таблица). Бул жыйынтыктар Марк жана башкалардын жыйынтыктары менен дал келет.63, ал жылуулук менен иштетүүдөн кийин кешью ширесинин рН деңгээли сакталгандан кийин төмөндөгөнүн белгилеген. Фермент менен иштетүүдөн кийин пектиндин деградациясы жана галактурон кислотасынын пайда болушу сактоо учурунда рН деңгээлинин жогорулашына жооптуу болушу мүмкүн. Фермент менен иштетилген үлгүлөрдүн рН деңгээли сактоо учурунда 4,05 жана 4,31 ортосунда калган, ал эми иштетилбеген алма ширесинин рН деңгээли 4,12 жана 4,33 ортосунда болгон.
Иштетилбеген жана лактаза менен иштетилген үлгүлөрдүн жалпы кычкылдуулугу (ЖК) сактоо убактысынын көбөйүшү менен төмөндөө тенденциясын көрсөттү (1-таблица). Кычкылдуулуктун төмөндөшү органикалык кислоталардын углеводдорго айланышына же ферменттик реакцияларга, ошондой эле ширени сактоо учурундагы кычкылданууга байланыштуу болгон.64Контролдук алма ширесинин жана фермент менен иштетилген үлгүлөрдүн жалпы кычкылдуулугу башка ширелерге караганда төмөн болгон (кулпунай ширеси 0,9%, кара өрүк ширеси 2,2%, кумкват ширеси 1,0%, өрүк ширеси 2,4%, апельсин ширеси 0,8%), бирок башка ширелерге окшош (мисалы, алмурут ширеси 0,3%).62Тазаланбаган жаңы сыгылган алма ширесиндеги бул айырмачылыктар өсүү шарттары, генетикалык факторлор, жетилгендик деңгээли жана иштетүү ыкмалары сыяктуу ар кандай факторлорго байланыштуу болушу мүмкүн.65Контролдук жана лактаза менен иштетилген алма ширесинин жалпы кычкылдуулугунун төмөндөшү Сингх жана башкалар тарабынан берилген жыйынтыктарга дал келет.6674 күн сакталгандан кийин Jin Nuo алма ширесинин жалпы кычкылдуулугунун төмөндөшү жөнүндө. Башка жагынан алганда, Ошмянский жана Войдильо67салттуу тактоо ыкмаларынын таасирин изилдеп жатканда алма ширесинин кычкылдуулугунда эч кандай олуттуу өзгөрүүлөрдү тапкан жок.
1-таблицада келтирилген жыйынтыктар лактаза менен иштетилген алма ширесинин жалпы эрүүчү катуу заттарынын (ЖЭК) мааниси иштетилбеген үлгүгө караганда жогору болгонун көрсөтүп турат. Бул жыйынтыктар жарыяланган изилдөөлөргө дал келет.68Андан тышкары, 1-таблицада көрсөтүлгөндөй, контролдук алма ширесинин тобунун TSS мааниси баштапкы учурда 9,58 болгон жана сактоо мөөнөтүнүн аягында 11,05ке жеткен. Бул маанилер Хамид жана башкалар билдирген жаңы алма ширесинин TSS маанилеринен төмөн.69(тиешелүүлүгүнө жараша 11,2 жана 11,80). Лаккоза менен иштетилген алма ширесинин үлгүлөрүнүн TSS мааниси бир кыйла жогорулап, 11,23төн баштап, 4°C температурада эки жума сакталгандан кийин 12,93кө жеткен (1-таблица). Сактоо учурунда TSSтин ушул сыяктуу жогорулашы цитрус жемиштеринде, лимондордо жана таттуу апельсиндерде да байкалган. Сактоо учурунда жалпы эрүүчү катуу заттардын (TSS) көбөйүшү полисахариддердин (крахмалдын) моносахариддерге (канттарга) гидролизденишине, ширенин суусузданышынан улам концентрациясынын жогорулашына жана ширедеги пектиндин эрүүчү катуу заттарга чейин бузулушуна байланыштуу болушу мүмкүн. Жалпы эрүүчү катуу заттардын (TSS) көбөйүшү, Хамед ж.б. билдиргендей, пектиндин же целлюлозанын тиешелүүлүгүнө жараша пектин же целлюлозанын эрүүчү канттарга айланышы же крахмалдын канттарга гидролиздениши аркылуу пайда болушу мүмкүн болгон эрүүчү канттардын көбөйүшүнөн улам болушу мүмкүн.69.Алма ширесинин касиеттерине лакказанын таасирин визуалдык түрдө байкоого болот, анткени лакказа менен иштетилген алма ширеси иштетилбеген ширеге караганда жакшыраак агып кетүүчүлүгүн жана төмөнкү илешкектүүлүгүн көрсөтөт. Бул байкоо 1-таблицада жазылган; Фермент менен иштетилген үлгүнүн илешкектүүлүгү 1,87 cP, ал эми контролдук үлгүнүн илешкектүүлүгү 2,95 cP болгон. Илешкектүүлүктүн мындай олуттуу төмөндөшү пектин сыяктуу заттардын сууну кармоо жөндөмдүүлүгүнүн жогору болушуна жана бириккен тармактык түзүлүштүн пайда болушуна байланыштуу болушу мүмкүн.
Бул изилдөөдө лакказанын алма ширесинин күрөңдөө индексине (БИ) тийгизген таасири спектрофотометрди колдонуп, 420 нм толкун узундугундагы абсорбцияны өлчөө менен изилденген. Жыйынтыктар 1-таблицада көрсөтүлгөн. Сактоо учурунда иштетилген жана иштетилбеген топтордогу алма ширесинин үлгүлөрүнүн БИ акырындык менен өсүү тенденциясын көрсөттү. БИ күрөңдөө даражасын чагылдырат жана ... катары кызмат кыла алат.маанилүүферменттик жана ферменттик эмес күрөңдөө реакцияларынын индикатору. Сактоо учурунда абсорбция бир кыйла жогорулады (P < 0,05). Сактоо аяктагандан кийин,A420Контролдук жана фермент менен иштетилген топтордогу алма ширесинин үлгүлөрүнүн баалуулугу тиешелүүлүгүнө жараша 217% жана 121% га жогорулаган (1-таблица). Жыйынтыктар фермент менен иштетүү күрөң түскө өтүү даражасын болжол менен 56% га натыйжалуу төмөндөтө аларын көрсөтүп турат. Безерра жана башкалардын жыйынтыктары.[19]] биздин жыйынтыктарыбызга дал келет; Алар алма ширесин тунуктоо үчүн лакказа-глутаральдегид-кокос буласын колдонушуп, анын баштапкы түсүн 61% га төмөндөтүшкөн.
Мөмө-жемиш ширелериндеги полифенолдор адамдын организмине оң азыктык жана терапиялык таасир тийгизгени менен, алар белоктор менен реакцияга кирип, ширенин булуттуулугун, чөкмөлүүлүгүн же булуттуулугун пайда кылып, ошону менен продуктунун даамын жана жытын өзгөртүп, сактоо мөөнөтүн кыскартат.71Бул изилдөөнүн максаты Pleurotus ostreatus NRC 620 үлгүсүнөн алынган лакказаны колдонуп, алма ширесиндеги фенолдук кошулманын курамын коопсуз түрдө азайтуу болгон. 1-таблицада келтирилген жыйынтыктар лакказа менен иштетилген алма ширесиндеги жалпы фенолдук кошулманын курамы 4°C температурада сактоого чейин бир кыйла азайганын көрсөтүп турат. Андан тышкары, изилденген эки үлгүдө тең сактоо учурунда жалпы фенолдук кошулманын курамы да азайган (1-таблица). Сандри жана башкалар тарабынан жүргүзүлгөн изилдөөлөр.72фермент менен иштетилген алма ширеси өзүнүн антиоксиданттык активдүүлүгүн жана фенолдук кошулмалардын курамын сактап кала аларын көрсөттү. Бирок, Леттера жана башкалар тарабынан жүргүзүлгөн изилдөөнүн жыйынтыктары.73апельсин ширесин грибоктук лакказа менен дарылоо анын курамындагы фенолдук кошулмалардын курамын 45% га чейин азайта аларын көрсөтүштү.
Фенолдук кошулмалар эркин радикалдарды жок кылуу, синглеттик кычкылтекти калыбына келтирүү жана өчүрүү, суутек атомун өткөрүү жана эркин радикалдарга электрон берүү сыяктуу касиеттерге ээ экени көрсөтүлдү, бул аларды күчтүү антиоксиданттарга айлантат.74Ошондуктан, бул изилдөөдө муздаткычта 14 күн сакталган алма ширесинин антиоксиданттык активдүүлүгүнө лакказанын таасирин баалоо үчүн DPPH жана FRAP негизиндеги ыкмалар колдонулган (2-таблица). Эки ыкма тең сактоо учурунда антиоксиданттык активдүүлүктүн жогорулаганын көрсөттү, бул эркин фенолдук кошулмалардын көбөйүшүнө же Майлард реакциясынын продуктуларынын (MRP) пайда болушуна байланыштуу болушу мүмкүн, ал эми Майлард реакциясынын продуктулары антиоксиданттык активдүүлүктүн жогорулашынын себеби болушу мүмкүн.75Ферменттик эмес күрөңдөө реакциялары (аскорбин кислотасынын деградациясы, Майяр реакциялары жана канттардын кислота менен катализделген деградациясы) күрөң пигменттерди (меланоидиндерди) пайда кылат. Аскорбин кислотасынын ортоңку деградация продуктулары жана канттын деградация продуктулары (мисалы, карбонил кошулмалары) аминокислоталар менен Майяр реакциялары аркылуу реакцияга кириши мүмкүн.76Мөмө-жемиштерди жана жашылчаларды сактоо учурунда күрөң түскө боёо кеңири изилденгени менен, бул реакциялар жөнүндөгү түшүнүгүбүз чектелүү бойдон калууда.77FRAP ыкмасы менен салыштырганда, лактаза менен иштетилген алма ширеси DPPH ыкмасы менен бир кыйла төмөн антиоксиданттык активдүүлүктү көрсөттү (2-таблица) жана бардык үлгүлөрдүн антиоксиданттык активдүүлүгү сактоо убактысынын көбөйүшү менен бир кыйла жогорулады. Бул изилдөөдө антиоксиданттык активдүүлүктү аныктоонун эки башка ыкмасы колдонулган, анткени алардын принциптери ар башка. DPPH ыкмасы эркин радикалдарды нейтралдаштыруу жөндөмүн өлчөйт, ал эми FRAP ыкмасы темир иондорун калыбына келтирүү жөндөмүн өлчөйт. Ошондуктан, изилденген үлгүлөрдүн антиоксиданттык активдүүлүгүн жакшыраак түшүнүү үчүн антиоксиданттык активдүүлүктү аныктоонун бир нече ыкмаларын колдонуу сунушталат.78
Бул изилдөөнүн негизги ачылыштарынын бири - *Pleurotus ostreatus* лакказасы NRC 620 70°C жана рН 3.0до оптималдуу активдүүлүктү көрсөтөт. Ширени тунуктоо үчүн кеңири колдонулган башка грибоктук лакказалар, мисалы, *Trametes versicolor* жана *Ganoderma lucidum* лакказалары менен салыштырганда, *P. ostreatus* NRC 620 жогорку жылуулук туруктуулугун жана кислоталуураак рН көрсөтөт. *Trametes versicolor* жана *Ganoderma lucidum* лакказалары адатта 50-60°C диапазонунда жана рН 3.5 жана 5.0 ортосундагы маанилерде оптималдуу активдүүлүктү көрсөтөт. Бул айырмачылык, айрыкча, төмөнкү рН маанилериндеги туруктуулук маанилүү болгон кислоталуу ширелер үчүн, ширени тунуктуруунун натыйжалуулугун жакшыртууга салым кошушу мүмкүн. *P. башка изилденген грибоктук лакказалар менен салыштырганда, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 татаал шарттарда натыйжалуу иштөө жөндөмүн көрсөтөт. Анын жогорку оптималдуу активдүүлүк температурасы өнөр жайлык колдонмолордо потенциалдуу артыкчылыктарды, мисалы, реакциянын ылдамдыгын жана микробдук булгануунун азайышын көрсөтүп турат. Көптөгөн ширелердин кислоталуу мүнөзүнө жакшы ылайыктуу болгон анын төмөн рН деңгээли ширени тазалоо процесстеринде пайдалуу болушу мүмкүн. Бул жыйынтыктар кеңири масштабда колдонуу үчүн андан ары изилдөөнү негиздейт, бул *Pleurotus ostreatus* NRC 620 салттуу грибоктук лактаза булактарына ылайыктуу альтернатива болуп саналат. Мурунку изилдөөлөргө салыштырмалуу, биз оптималдуу температура 60°C, ал эми оптималдуу рН 3.0 экенин аныктадык. 60°C температурада 80 мүнөт реакциядан кийин, *Ganoderma lucidum* лактазасы сакталып калган.46анын активдүүлүгүнүн %.79 Курниавати жана Ницелла боюнча80, *Ganoderma lucidum* ферменттери 25°C жана рН маанилери 5,0дөн 8,0гө чейин, ал эми рН 6,0 жана 10дон 30°Cге чейинки температурада эң сонун жана орточо туруктуулукту көрсөтөт. Бул изилдөөдө биз *Pleurotus ostreatus* үчүн ферменттин активдүүлүгү үчүн оптималдуу рН жана температура тиешелүүлүгүнө жараша 3,0 жана 70°C экенин аныктадык. Эки саат бою 40°C жана 50°C инкубациядан кийин, фермент өзүнүн активдүүлүгүнүн тиешелүүлүгүнө жараша 68,33% жана 59,61% сактап калган. Андан тышкары, Pleurotus ostreatus NRC 620 лакцасы 50°Cден 80°Cге чейинки кеңири температура диапазонунда жогорку активдүүлүктү көрсөтүп, дээрлик максималдуу активдүүлүккө (69%–98%) жеткен, ал эми максималдуу активдүүлүк 70°Cде байкалган.
Жыйынтыктап айтканда, статикалык шарттарда алынган устрица козу карынынын лактазасы NRC620 ар кандай рН жана температура шарттарында оптималдуу активдүүлүктү жана туруктуулукту көрсөтүп, башка фермент булактарына салыштырмалуу жогорку туруктуулукту көрсөттү. 10 мМ MgSO₄ жана CuSO₄ кошуу ферменттин активдүүлүгүн тиешелүүлүгүнө жараша болжол менен 21% жана 35% га жогорулатты. Алма ширесине кайра иштетилгенде, фермент рН жана илешкектүүлүктү төмөндөттү, ал эми фенолдук курамы сактоо учурунда бир аз гана төмөндөдү.
Жыйынтыктар тамак-аш өнөр жайында, айрыкча суусундуктарды тунуктоодо лакказанын потенциалын тастыктайт. Фенолдук кошулмаларды атайын майдалоо менен, лакказан кирдөөнү азайтып, тунуктугун жакшыртат, ошондой эле жумшак иштөө шарттарында жемиш ширелеринин сапатын сактайт. Желатин, бентонит жана силикагель сыяктуу салттуу тунуктоочу заттардан айырмаланып, лакказан калдыктарды пайда кылбайт же суусундуктардан жагымдуу жыттарды кетирбейт, бул аны экологиялык жактан таза жана туруктуу вариант кылат. Андан тышкары, башка ферменттер жана чыпкалоо ыкмалары менен салыштырганда, лакказан продуктунун сапатына доо кетирбестен, максаттуу жана үнөмдүү чечимди сунуштайт.
Kyomuhimbo, HD жана Brink, HG. Жез камтыган лактазаларды колдонуу жана иммобилизациялоо стратегиялары; сереп. Heliyon 9, e13156 (2023).
Жарыяланган убактысы: 2025-жылдын 15-декабры